RESOURCES
激光共聚焦顯微拉曼光譜儀|SERS光譜定量檢測苯二氮卓類藥物總量的研究
苯二氮卓類藥物（Benzodiazepines, BZDs）屬于中樞神經系統藥物，具有抗焦慮、抗癲癇、抗驚厥、催眠等藥理作用具有較好的療效。由于BZDs結構相似，療效類同，很多BZDs的治療量與中毒量、致死量相接近，過量使用易引起中毒乃至死亡。此外，許多麻醉搶劫、麻醉強奸案件都有涉及這類藥物。然而，由于BZDs在體內的濃度隨代謝過程逐漸降低，很多刑事案件檢材，特別是藥物在血、尿中已含量甚微，難以被檢測。因此，建立簡單、快速、靈敏、準確的檢測方法，用于快速定量篩查體液(血、尿)中痕量BZDs的總含量是十分必要的，對促進醫療用藥及刑事偵查的發展具有積極的意義，也是很有挑戰的課題。
相比于傳統的高效液相色譜和LC-MS方法，表面增強拉曼光譜(SERS)具有超高靈敏度，且可直接給出被檢分子的結構信息，還具有快速、無損的特性，在生化樣品分析中具有獨特的優勢。實現SERS檢測的關鍵在于SERS基底的構建。傳統貴金屬(Ag, Au)SERS基底盡管SERS活性高，但其價格昂貴，不利于商業化應用。目前比較普遍的做法是在半導體氧化物(ZnO, TiO2)上負載少量貴金屬納米粒子，其增強機理不僅有貴金屬本身的電磁(EM)增強機理，還具有貴金屬與半導體氧化物間的電荷轉移(CT)增強機制，進而增強SERS活性，提高檢測的靈敏度。此外，貴金屬晶面對SERS活性也有重要的影響，特別是本課題組采用置換反應合成了Ag(111)晶面取向生長的大尺寸Ag納米片，這種Ag納米片由于晶面取向的優勢在檢測罌粟堿時表現出高SERS活性和選擇性。顯然，目前的合成方法制備半導體氧化物-貴金屬納米復合材料雖有助于減少貴金屬用量，但也失去了晶面取向帶來高SERS活性的優勢。因此，如何既保持貴金屬晶面取向優勢，又實現與半導體氧化物間的CT協同增強機制，是本工作重點解決的課題。
該研究在課題組合成大尺寸Ag納米片的基礎上，采用化學修飾方法在Ag納米片上生長ZnO納米粒子，對其結構、組成和形貌進行表征。通過對ZnO納米粒子負載量的優化實驗發現，只有合適的ZnO負載量(17.5 wt%)才有SERS性能，且具有高SERS檢測穩定性和均一性(圖1)。基底在空氣氛圍環境中放置30天，其SERS強度仍保持初始強度的93％，優于純Ag納米片的81％。如果在Ag納米片表面修飾非半導體氧化物(SiO2)時，其SERS信號強度隨SiO2負載量單調性下降，這充分說明Ag與ZnO間CT協同機制的存在。除一系列實驗(XPS,光電流測試和CT增強程度PCT的計算等)分析外，還應用分子動力學模擬(MD)計算分析了作用在該基底上的探針分子鍵能變化，發現當ZnO 修飾密度為0.106 NPs /nm2時基底與探針分子的鍵能最大(-19.1 eV)，為分析Ag與ZnO間的CT增強機制提供理論依據 (圖2)。
圖1：Ag納米片表面負載ZnO納米粒子的表征。
圖2：基于Ag-ZnO-探針分子間CT增強機理的研究
在上述基礎上，優化后的Ag NS/ZnO基底應用于艾司唑侖（EST，為傳統BZDs藥物）的靈敏檢測，線性范圍為10-9至10-3 M，檢出限低至0.5 nM, 優于文獻報道的HPLC、電化學及ELISA等經典方法的結果；表現出優異的選擇性，即使分別加入100倍以上濃度的無機鹽、有機物、氨基酸和其他藥物等，都沒產生明顯的干擾。通過在人體尿液、牛血清蛋白中加標回收實驗，獲得滿意的回收率和RSD值(≤3.71％)，表明該基底在EST的檢測應用中具有很好的可靠性 (圖3)。
圖3：SERS檢測單一藥物EST含量的線性圖及其抗干擾性。
進一步應用于5種BZDs藥物總量的快速檢測，包括EST、奧沙西泮(OXA)、阿普唑侖(ALP)、三唑侖(TRI)和勞拉西泮(LOR)。由于此5種為同系物，有相同的骨架，擁有共同的特征峰，位于1163 cm-1，且濃度相同，對應的峰強度也不變。激光共聚焦拉曼光譜儀為利用EST的線性工作曲線來定量檢測BZDs總含量提供了可行之處 (圖4)。在此，準備了12個混合樣品，包括兩種、三種、四種或五種BZDs藥物的混合，也有濃度差異。實驗測試結果表明，BZDs藥物的總濃度可以從EST的線性工作曲線直接獲得，測試結果與總加標濃度具有很好的吻合度。將BZDs混合樣注射到小鼠體內，隨小鼠代謝采集不同時間的小鼠血清，發現血清中BZDs藥物總量隨小鼠代謝過程在開始階段迅速增加，12 h達到最大值，此后逐漸降低。這一變化趨勢與LC-MS/MS檢測結果一致，說明該基底及其SERS檢測方法對于定量檢測BZDs藥物是可靠且高效的。
圖4：快速檢測BZDs總含量。
綜上，該工作開發了一種SERS定量分析方法，僅利用一種BZD藥物作為標準品即可定量測定法醫和生物醫學環境中BZDs藥物總量，從而可針對族類藥物總量快速、靈敏的篩查。這是通過在大尺寸(111)晶面Ag納米片上修飾少量ZnO為SERS活性基底來實現的，其既結合Ag(111)晶面取向優勢又實現了CT增強效應，表現出優異的SERS活性和穩定性。該基底成功應用于血清和尿樣中EST濃度的高靈敏度和高選擇性SERS檢測。并進一步應用于5種BZDs藥物總濃度的檢測，特別是成功監測了隨小鼠代謝過程中小鼠血清中BZDs藥物總量的變化趨勢。該研究工作瞄準族類藥物的靶向篩查模型，可作為急診診斷和法醫鑒定極具價值的分析工具。
該研究工作發表于Anal. Chem. 2021, 93, 3403-3410；入選Anal. Chem.第93卷第7期封面文章。
文章信息
這一成果以“Group-Targeting SERS Screening of Total Benzodiazepines Based on Large-Size (111) Faceted Silver Nanosheets Decorated with Zinc Oxide Nanoparticles”為題發表在Analytical chemistry上。蘭州大學葉為春教授為論文通訊作者。
文章鏈接https://dx.doi.org/10.1021/acs.analchem.0c04399
本研究采用的是北京卓立漢光儀器有限公司 “Finder Vista”激光顯微共聚焦拉曼光譜儀系統，如需了解該產品，歡迎咨詢我司。
如果您認為本文存在侵權之處，請與我們聯系，會及時處理。我們力求數據嚴謹準確，如有任何疑問，敬請讀者不吝賜教。我們也熱忱歡迎您投稿并發表您的觀點和見解。
13810146393
在線咨詢
